植物高爾基體膜蛋白提取試劑盒

簡要描述：產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物高爾基體膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物組織樣本的高爾基體膜蛋白提取。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-12-21
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CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白表達蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

植物

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是蛋白回收率會下降。
? 提取液C在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。
? 膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。
? 膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。
? 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM，r/min）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

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使用方法

1. 提取液準備：
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100-200 mg新鮮植物葉片組織樣本，用PBS洗滌干凈。
3. 用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
4. 加入1000 μl冷的試劑 A，置冰上10分鐘。
5. 用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
6. 勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。
7. 上清在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
8. 將上清在4℃，6000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
9. 上清在4℃，50000×g力條件下離心20分鐘。棄上清，留沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl冷的試劑B，混勻。
11. 在4℃，50000×g力條件下離心30分鐘。棄上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入400 μl蛋白提取液C，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩15-30分鐘，至沉淀充分裂解，無明顯沉淀。
13. 在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
14. 將上清吸入另一干凈離心管，在37℃水浴（氣浴）15分鐘。
15. 在37℃， 1000×g離心5分鐘。此時溶液分為2層，下層是膜蛋白約為30-50 μl。
16. 小心移除上層，留下下層大約40 μl液體。
17. 用50-100 μl膜蛋白溶解液D溶解下層，即可得到高爾基體膜蛋白樣品。
18. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大組織樣本上樣量以提高膜蛋白濃度。
減少膜蛋白溶解液用量。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時采用低電壓低電流電泳。
膜蛋白豐度通常較低，有條件可以嘗試用銀染染色。

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