貝博® BBproExtra® 總蛋白提取試劑盒（2D電泳用）提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中提取總蛋白。配合其他試劑時，也可以用于植物、細菌、真菌、酵母等樣品的總蛋白提取。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。
總蛋白提取試劑盒（2D電泳用）含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
產品特點
1.使用方便。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
使用方法
細胞總蛋白提取：
1.提取液制備：
每500ul的總蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑混合物，混勻后備用。
2.取5-10×106個細胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3.用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每5×106個細胞中加入500ul的總蛋白提取液，混勻后，室溫振蕩20-30分鐘。
5.在14000×g條件下離心10分鐘。
6.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
7.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
組織總蛋白提取：
1.提取液準備：
每500ul冷的總蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2.取50-100mg組織樣本，用PBS洗干凈，然后用刀盡可能剪碎，加入500ul總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3.將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4.在4℃，10000-14000×g條件下離心15分鐘。
5.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到總蛋白。
6.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
