2-8℃避光

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請盡快使用完！

6個月

顯微鏡

動物細胞

1. 熒光顯微鏡/激光共聚焦/流式細胞儀/熒光酶標儀/熒光光度計等
2. 離心機
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

1. PBS緩沖液
2. 或者HBSS

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
2. 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定條件。以下方法僅供參考。
3. 染色后立即進行分析。
4. 以下以顯微鏡觀察為例，也可以根據(jù)需要設(shè)定對照細胞，用破膜劑破膜后染色，用流式/酶標儀/熒光光度計等設(shè)備檢測樣品細胞相對于對照細胞的膜破損率。

染色工作液配制
用染料稀釋液將T11細胞染料50-500倍稀釋，配成染色工作液，充分混勻備用。
【注】:
? 也可以不用試劑盒中的稀釋液，直接用PBS等稀釋。

細胞染色
對于貼壁細胞
1. 制備需要檢測的細胞模型。
2. 待細胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的染色液。于生長狀態(tài)下孵育1分鐘～10分鐘（具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定）。
3. 用PBS/HBSS洗滌細胞3-4次。每次盡可能吸干PBS。
【注】:
? 注意細胞操作的整個過程，避免人為的細胞膜損傷。例如采用合適的離心力大小。
4. 加入新鮮培養(yǎng)基或PBS并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。
激發(fā)/發(fā)射波長550/610nm。
【注】:
? 若細胞染色太強，建議降低染料濃度或縮短染色時間。
? 若染色不夠充分，無熒光細胞，建議增加染料濃度或延長染色時間。

對于懸浮細胞
1. 離心，吸除上清。
2. 利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細胞，于生長狀態(tài)下孵育1分鐘～10分鐘（具體時間需根據(jù)細胞類型而定）。
3. 離心，吸除染色液。
4. 用PBS/或HBSS洗滌細胞3-4次。每次盡可能吸干PBS。
【注】:
? 注意細胞操作的整個過程，避免人為的細胞膜損傷。例如采用合適的離心力大小。
5. 加入新鮮培養(yǎng)基或PBS重懸細胞。
6. 置于熒光鏡下觀察。
激發(fā)/發(fā)射波長550/610nm。
【注】:
? 對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng)細胞粘合劑處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。
? 若細胞染色太強，建議降低染料濃度或縮短染色時間。
? 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

觀察結(jié)果：
在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察細胞。激發(fā)/發(fā)射波長為550/610nm。
膜完整細胞沒有熒光，膜不完整細胞顯紅色熒光。