細胞膜/胞漿/核蛋白分步提取試劑盒

簡要描述：產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細胞膜蛋白/胞漿蛋白/核蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞中分步提取膜蛋白/胞漿蛋白/核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-12-21
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產品分類

CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白表達蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

適用樣本

動物細胞

產品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至1小時。
3.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產品應用

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液制備：
每400ul冷的蛋白提取液A/B/D中都分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和2ul磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，800×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細胞中加入400ul冷的蛋白提取液A，混勻后，在4℃條件下用試劑盒所配針筒反復吸吹細胞，使細胞破裂。
5. 在4℃，1000×g條件下離心5分鐘。
6. 將上清（I）吸入另一干凈離心管，在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒，充分混勻。
7. 將混勻的提取液B置4℃低速振蕩30-40分鐘。
8. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
9. 在步驟6中所得到的上清（I）中加入8ul提取液C，充分混勻。
10. 在2-8℃振蕩20-30分鐘。
11. 在37℃水浴10分鐘。
12. 在37℃下 1000g離心3分鐘，此時溶液分為兩層，上層是胞漿蛋白部分，下層部分（II）是膜蛋白約為40-50μl。
13. 將上層小心吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白。
14. 用50-100μl冰冷的提取液D溶解步驟12中的下層部分（II），即得膜蛋白。
15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解，導致核蛋白/膜蛋白濃度低。只要適當延長試劑BC的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細胞的上樣量。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取時出現膠狀沉淀？
核蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。

參考文獻

1.Huimin Cao, Li Wang, Beibei Chen, et al.
DNA Demethylation Upregulated Nrf2 Expression in Alzheimer’s Disease Cellular Model
Front Aging Neurosci 2015 （IF=4.348）

2.Guang Yu, Tonghai Yan, Ye Feng, et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

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