細菌胞質蛋白提取試劑盒

簡要描述：產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細菌胞質蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取胞質蛋白，包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。提取過程簡單方便。本試劑盒含有的配方能夠有效裂解細菌組份，試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-12-21
訪問量：336

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產品分類

CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白表達蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

細菌

產品特點

1.使用方便，從細菌中提取蛋白不需經過超聲破碎等前處理。
2.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
5.本品可用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
6.本品不含EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應用。

產品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 離心收集需要提取蛋白的菌體，用PBS洗菌體2次。
3. 按每100-150mg濕重菌體樣本加入500ul冷的提取液A（大約菌體和提取液體積比1:3-1:5，淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩1-2小時，至菌體裂解，菌體沉淀減少。
4. 將菌液在2-8℃低溫下12000g離心5分鐘，取上清。
5. 在37℃水浴10分鐘。
6. 在37℃， 1000g離心3分鐘。
7. 此時液體分為2層，小心吸取上層溶液，即為胞質蛋白。
8. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
細菌蛋白豐度較低，需要盡可能加大細胞上樣量。處理部分樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

參考文獻

1.Gang Zhou, Qing-shan Shi, et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics Volume 133, 5 February 2016, P134–143 （IF=3.888）

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