囊泡提取試劑盒根據(jù)樣本類型和技術(shù)原理差異，可分為多種類型，其使用細節(jié)需結(jié)合具體應(yīng)用場景進行規(guī)范化操作：

　　一、樣本預(yù)處理規(guī)范

　　- 植物樣本(多汁植物)

　　- 組織純化：僅保留目標部位(如花瓣、葉片)，去除花托、莖稈等干擾組織。

　　- 榨汁優(yōu)化：采用電動碾磨榨汁機處理，出汁率控制在200~300 mL/kg，汁液經(jīng)濃縮50倍后獲得高純度囊泡。

　　- 細胞培養(yǎng)上清

　　- 差速離心：離心(3000×g，15 min)去除死細胞及碎片；二次離心(10000×g，20 min)清除微小顆粒，上清液需在4℃保存。

　　二、核心提取流程

　　- 化學(xué)沉淀法(通用型)

　　- 裂解結(jié)合：每4 mL上清加入1 mL提取液A，顛倒混勻1分鐘，確保充分接觸。

　　- 低溫靜置：2~8℃孵育過夜，促進囊泡聚集。

　　- 高速收集：10000×g離心60分鐘，棄上清后以50~100 μL保存液重懸沉淀。

　　三、質(zhì)控與下游應(yīng)用

　　- 純度驗證

　　- 標志物檢測：Western Blot檢測CD63、CD9等外泌體標記蛋白，排除calnexin等非外泌體蛋白污染。

　　- 形態(tài)學(xué)分析：通過透射電鏡觀察典型杯狀結(jié)構(gòu)，NTA技術(shù)確認粒徑分布(30~150 nm為外泌體主峰)。

　　- 功能化應(yīng)用

　　- 組學(xué)研究：提取的RNA適用于RT-qPCR及NGS測序。

　　- 臨床轉(zhuǎn)化：腫瘤來源囊泡的PD-L1檢測可預(yù)測免疫治療響應(yīng)。

　　囊泡提取的核心在于平衡純度與得率，需根據(jù)研究目的靈活調(diào)整方案。