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怎么配置RIPA裂解液

更新時間:2024-09-12      點擊次數:2374
  RIPA裂解液是一種常用的細胞裂解緩沖液,用于從培養的細胞或組織樣本中提取蛋白質。這種緩沖液能夠有效破裂細胞膜和細胞器膜,釋放胞內蛋白,同時通過添加的抑制劑減少蛋白降解。以下描述如何配置RIPA裂解液:
  一、準備材料和設備
  1. 材料:配置RIPA裂解液主要用到的材料包括,Tris-base、NaCl、NP-40(非離子型去垢劑)、去氧膽酸鈉、SDS(十二烷基硫酸鈉)、EDTA(解析鉛)、去離子水、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑等。
  2. 設備:配制所需的設備包括pH計、電子天平、磁力攪拌器以及各種量程的移液器和對應的滅菌移液槍頭、容量瓶或燒杯用于配制和儲存裂解液、以及調整pH的鹽酸或氫氧化鈉溶液。
  3. 防護用品:在配制過程中,操作者應佩戴適當的實驗室防護用品,如實驗服、手套和護目鏡,以保障安全。
  二、配制步驟
  1. 溶解Tris-base和NaCl:使用電子天平稱取適量的Tris-base和NaCl,置于預定容量的容量瓶或燒杯中,并加入適量的去離子水。
  2. 調整pH值:在磁力攪拌器的幫助下,攪拌至固體成分溶解。接著,利用pH計調整溶液的pH至7.4。通常這需要緩慢加入少量的鹽酸或氫氧化鈉溶液。
  3. 添加去垢劑和鹽:繼續向溶液中加入規定量的NP-40(1%)、去氧膽酸鈉(0.5%)以及SDS(0.1%)。這些物質幫助破裂細胞膜和細胞器膜,釋放出蛋白質。
  4. 加入抑制劑:為了保護釋放出的蛋白質不被降解,需要添加蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。這些抑制劑應在使用前即時添加,以免長時間放置導致失效。
  5. 補水定容:將所有溶解后的成分攪拌均勻,之后使用去離子水補足至最終所需體積。
  6. 混勻與保存:確保所有成分充分混勻后,RIPA裂解液就配制完成了。將裂解液分裝到干凈的容器中,通常存放于-20°C的環境中,避免反復凍融。
  三、注意事項
  1. 在使用RIPA裂解液提取蛋白之前,必須確認樣品中不含有影響實驗的污染物質,且根據實驗需要選擇適合的蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
  2. 由于RIPA中的一些成分(如SDS和NP-40)具有一定的毒性,操作時需小心謹慎,并遵守實驗室安全規程。
  3. RIPA裂解液一旦制備,其穩定性隨時間和存儲條件變化,因此建議標記配制日期,并在使用前檢查是否有沉淀或顏色變化。
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